Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CACNNNGTG | CACNNN↑GTG |
| GTGNNNCAC | GTG↓NNNCAC |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген DraIII из Deinococcus radiophilus
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер 2K
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 50 | 75 | 75 | 50 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2K, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
de Wit, C.M., Dekker, B.M.M., Neele, A.C., de Waard, A., FEBS Lett. 180: 219-223 (1985)Grosskopf, R., Wolf, W., Kessler, C., Nucleic Acid res. 13: 1517-1528 (1985)
