Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CATG | CATG↑ |
| GTAC | ↓GTAC |
Источник: Flavobacterium aquatile N3
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pUC19 ДНК за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
pUC19 ДНК
Оптимальный буфер: SE-буфер FaeI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 50 | 10 | 10 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°*С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием CmATG
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер FaeI, BSA.
Примечание:
FaeI может применяться для гидролиза ПЦР-фрагментов только после их дополнительной очистки.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Чернухин В.А., Килева Е.В., Томилова Ю.Э., Дедков В.С.. Неопубликованные данные (2006).
