Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGTACC | GGTAC↑C |
| CCATGG | C↓CATGG |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген KpnI из Klebsiella pneumonia
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 25 | 25 | 25 | 75 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина cпецифического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dсm-метилированием (CmCWGG): GGTACCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA.
Для фасовок Turbo (E079T и E080T) прикладывается буфер ROSE+
Примечание:
Длительная инкубация с BSA не рекомендуется .
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Smith, D.I., Blattner, F.R., Davies, J. Nucleic Acids Res. 3: 343-353 (1976).
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
