Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCCGGC | GCC↑GGC |
| CGGCCG | CGG↓CCG |
Источник: Kocurea rosea56
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pSXH7в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере B при 37°С за 1 час.
Субстрат для определения активности:
плазмидная ДНК pSXH7 (13092 п.н.). pSXH7 получена путем лигирования вектора pUC19/BamHIи BstX2I-фрагмент а геномной ДНК бактерии Sporosarcina species9 (GC-состав 70-76%). Содержит 42 сайта узнавания KroNI
Оптимальный буфер: SE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 75 – 100 | 10 – 25 | 25 – 50 | 75 – 100 | 50 |
Условия хранения: 20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 100 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэт анол, 50% глицерин
Срок хранения фермента 2 года
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5′-GC(5mC)GGC-3’/3′-CGG(5mC)CG-5′.
Примечание:
После инкубации 2 ед фермент а в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается.
Для эффективного гидролиза ДНК ферментом требуется два или больше сайтов узнавания.
