Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GTAC | GT↑AC |
| CATG | CA↓TG |
Источник: Rhodopseudomonas sphaeroides
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 50 | 50 | 75 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Литература:
Lynn, S.P., Cohen, L.K., Kaplan, S., Gardner, J.F. J.Bacteriol. 142: 380-383 (1980).
Лебедев Л.Р., Пустошилова Н.М., Репин В.Е., Дегтярев С.Х. Выделение и изучение свойств эндонуклеазы рестрикции RsaI из Rhodopseudomonas sphaeroides. // Прикладная биохимия и микробиология, т.27, вып.3, 330-337 (1991).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46
