Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
AATT | ↑AATT |
TTAA | TTAA↓ |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sse9 I из Sporosarcina species 9
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pBR322 ДНК за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
pBR322 ДНК
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B | G | O | W | Y | ROSE |
100 | 75 | 50 | 50 | 75 | 75 |
Условия хранения: 10 mM Tis-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-A(m6A)TT-3`/ 3`-TT(m6A)A-5`.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
При 37°С активность ~75% от максимальной.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
- Гончар Д.A., Дедков В.С., Верхозина В.A., Куснер Ю.С., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х. Прикл. Биохим. Микробиол. 34: 139-141 (1998).
- Гончар Д.А., Абдурашитов М.А., Охапкина С.С., Шагин Д.А., Килева Е.В., Дегтярев С.Х. Система рестрикции-модификации Sse9I: организация генов и сравнительный анализ структуры белков . // Молекулярная биология, т.41, №3, с. 491-498 (2007)
- В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
- В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46