Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| AACGTT | AA↑CGTT |
| TTGCAA | TTGC↓AA |
Источник: Acinetobacter calcoaceticus
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 80 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 0.05% Triton X-100; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности следует добавлять BSA в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Degtyarev, S.Kh., Abdurashitov, M.A., Kolyhalov, A.A., Rechkunova, N.I., Nucleic Acids Res. 20: 3787 (1992).
