Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGTGA(N)8 | GGTGA(N)8↑ |
| CCACT(N)7 | CCACT(N)7↓ |
Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген AsuHP I из Actinobacillus suis HP.
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере O при 37°С за 1 час.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dam-)
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10-25 | 50-75 | 100 | 75-100 | 25-50 | 100 |
Условия хранения: 15 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 30% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется dam-метилированием при перекрывании (GmATC): GGTGATCС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.
Примечание:
Фермент также может гидролизовать ДНК в положении 9/8 в зависимости от последовательности между сайтомузнавания и местом расщепления.
Литература:
Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Биол.Хим. 379: 573-574 (1998).
Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х – corresponding author Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 – на английском языке
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
