Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGGAC(N)10 | GGGAC(N)10↑ |
| CCCTG(N)14 | CCCTG(N)14↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus Fl
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 25 | 10 | 25 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Высокая концентрация фермента в реакционной смеси приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
В присутствии SAM фермент проявляет ДНК-метилтрансферазную активность, максимальную при 48°С. При наличии в в реакционной смеси 10мМ MgCl2 рестриктазная и метилтрансферазная активности проявляются одновременно и ДНК гидролизуется специфически и полностью. При отсутствии MgCl2 ДНК только метилируется и впоследствии устойчива к гидролизу BslFI.
Фермент также расщепляет ДНК в положении 11/15 от сайта узнавания.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Надеев А.Н., Каширина Ю.Г., Наякшина Т.Н., Дедков В.С., Мезенцева Н.В., Томилова Ю.Э., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2004).
