Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| RGCGCY | RGCGC↑Y |
| YCGCGR | Y↓CGCGR |
Источник: Bacillus stearothermophilus H2
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 50 | 10 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.5); 10 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°C.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Абдурашитов M.A., Килева E.В., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1994).
