Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| (N)8AAGNNNNNCTT(N)13 | ↑(N)8AAGNNNNNCTT(N)13↑ |
| (N)13TTCNNNNNGAA(N)8 | ↓(N)13TTCNNNNNGAA(N)8↓ |
Источник: Flavobacterium aquatile Ob10
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер W + SAM
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 75 | 100 | 50 | 70 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, SAM.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 0.01 mM.
Литература:
Дедков В.С., Синичкина С.А., Абдурашитов M.A., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2001).
В. С. Дедков, С. А. Синичкина, М. А. Абдурашитов, Д. В. Попиченко, С. X. Дегтярёв Эндонуклеазы рестрикции FalI и FalII из Flavobacterium aquatile Ob10 узнают 5′-(8/13)AAG(N)5CTT(13/8)-3′ и 5′-CG↓CG-3′, соответственно // Биотехнология, 2003, № 6, c 24-29
