Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CAATTG | C↑AATTG |
| GTTAAC | GTTAA↓C |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Mfe I из Mycoplasma fermentans.
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 75 | 10 | 25 | 75 | 25 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE +.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Halden, N.F., Wolf, J.B., Cross, S.L., Leonard, W.J. Clin. Res. 36: 404a (1988).
