Войти/зарегистр.
войти
Восстановить пароль
Пароль будет отправлен вам на почту
Gla I
| Название фермента | Gla I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | GlaI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E493 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… R(5mC)▼GY …3'
3'… YG▲(5mC)R …5'
|
||||||||||||
| Источник | Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Gla I из Glacial ice bacterium Gl29 | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 30 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг плазмиды pHspAI2/GsaI по единственному сайту 5`-G(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)G-5` за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pHspAI2/GsaI и образование двух основных (3,419 и 699 п.н.) фрагментов ДНК (см. рисунок ниже, дор. 3-5). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCGC-3`/3`-CGCG-5`, имеющим три и два 5-метилцитозина. Определение активности GlaI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI2/GsaI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 2 - Контрольная ДНК pHspAI2/GsaI, 3 - 0.5 мкл GlaI (разб. 1/100), 4 - 1 мкл GlaI (разб. 1/100), 5 - 2 мкл GlaI (разб. 1/100), 6 - 1 мкл неразбавленного фермента GlaI, 1 и 7- 1 Kb SE ДНК-маркеры. Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE. Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE. В присутствии 20% DMSO активность фермента значительно возрастает по всем сайтам без потери специфичности | ||||||||||||
| Тестируемая ДНК | Субстрат pHspAI2/GsaI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI2, [modal_dna seq="phspai2.txt" title="Быстрый просмотр"] линеаризованной эндонуклеазой рестрикции GsaI. Плазмида pHspAI2 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Haemophilus species A1, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.HspAI, и единственный канонический сайт узнавания GlaI 5`-G(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)G-5` [2]. | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Triton X-100, 50 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | |||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 100 ед фермента Gla I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет ДНК, содержащую N4-метилцитозин [1]. | ||||||||||||
| Поставляется с ферментом | 10 Х SE-буфер Y, плазмида pHspAI2/GsaI. | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |
Применение
|
Gla I
| Название фермента | Gla I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | GlaI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E493 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… R(5mC)▼GY …3'
3'… YG▲(5mC)R …5'
|
||||||||||||
| Источник | Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Gla I из Glacial ice bacterium Gl29 | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер Y | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 30 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг плазмиды pHspAI2/GsaI по единственному сайту 5`-G(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)G-5` за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pHspAI2/GsaI и образование двух основных (3,419 и 699 п.н.) фрагментов ДНК (см. рисунок ниже, дор. 3-5). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCGC-3`/3`-CGCG-5`, имеющим три и два 5-метилцитозина. Определение активности GlaI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI2/GsaI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 2 - Контрольная ДНК pHspAI2/GsaI, 3 - 0.5 мкл GlaI (разб. 1/100), 4 - 1 мкл GlaI (разб. 1/100), 5 - 2 мкл GlaI (разб. 1/100), 6 - 1 мкл неразбавленного фермента GlaI, 1 и 7- 1 Kb SE ДНК-маркеры. Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE. Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE. В присутствии 20% DMSO активность фермента значительно возрастает по всем сайтам без потери специфичности | ||||||||||||
| Тестируемая ДНК | Субстрат pHspAI2/GsaI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI2, [modal_dna seq="phspai2.txt" title="Быстрый просмотр"] линеаризованной эндонуклеазой рестрикции GsaI. Плазмида pHspAI2 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Haemophilus species A1, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.HspAI, и единственный канонический сайт узнавания GlaI 5`-G(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)G-5` [2]. | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Triton X-100, 50 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | |||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 100 ед фермента Gla I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет ДНК, содержащую N4-метилцитозин [1]. | ||||||||||||
| Поставляется с ферментом | 10 Х SE-буфер Y, плазмида pHspAI2/GsaI. | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |
Применение
|