Описание
Сайт узнавания:
| G↑AATTC |
| CTTAA↓G |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген EcoR I из Escherichia coli
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер EcoRI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 75 | 75 | 75 | 50 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 40-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер EcoRI, BSA (кроме E057T и E058T).
Для фасовок Turbo (E057T и E058T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
При большом избытке фермента, при использовании неоптимального буфера возможно появление звездчатой активности.
Длительная инкубация c BSA не рекомендуется из-за появления звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Albertsen, H.M., Le Paslier, D., Abderrahim, H., Dausset, J., Cann, H., Cohen, D. Nucleiv Acids Res. 17: 808 (1989).
Дегтярев С.Х., Репин В.Е., Речкунова Н.И. Штамм бактерий Proteus vulgaris — продуцент рестриктазы PvuII. // Авторское свидетельство SU 1632974 (1991).
Дедков В.С., Дегтярев С.Х., Речкунова Н.И., Серов Г.Д., Пучкова Л.И., Вайткявичус Д.П., Кюдулене Э.-Л.Ю., Янулайтис Э.-А.А. Штамм бактерий Staphilococcus saprophyticus продуцент сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции SsrI. // Авторское свидетельство SU 1486512 (1989).
