Pcs I

5,500.00 22,000.00 

  • CNY: 78.36 ¥ - 313.43 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Pcs I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 1000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G / G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC)
  • Источник: Paracoccus carotinifaciens 3K
  • Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI
  • Оптимальная температура: 37
  • Температура инактивации, 20 мин при: 65
Артикул: E505 Категория:

Описание

Сайт узнавания:

(5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G
G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC)

Источник: Paracoccus carotinifaciens 3K

Определение единицы активности:

За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза единственного сайта
5`-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3`
в 1 мкг ДНК плазмиды pMHgaI/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHgaI/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4) и образование двух фрагментов ДНК (см. рисунок ниже, дор. 3-5).

Определение активности PcsI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHgaI/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки:
1 и 6 — 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2: исходная ДНК , pMHgaI/DriI
3: 0.5 мкл Pcs I
4: 1 мкл Pcs I
5: 2 мкл Pcs IПродукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.

Субстрат для определения активности:

Плазмида pMHgaI содержит гены ДНК-метилтрансфераз
M1.HgaI (сайт узнавания 5`-CGCTC-3`)
и M2.HgaI (сайт узнавания 5`-GACGC-3`)
и содержит единственный сайт узнавания PcsI :
5`-W(5mC)GNNNNNNN(5mC)GW-3`
3`-WG(5 m C)NNNNNNNG(5mC)W-5` [1].

Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
50 25 10 50 20

Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин, 100 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.

Лигирование:

Неспецифический гидролиз:

Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Pcs I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].

С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI

Примечание:

Литература:

1. Чернухин В.А., Наякшина Т.Н., Тарасова Г.В., Голикова Л.Н., Акишев А.Г., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Paracoccus carotinifaciens 3K — продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Pcs I. // Патент на изобретение RU 2377294 С1 (2009).

Доступные варианты

АртикулРазмер фасовкиФасовкаЦена 
E505S50 е.а.5,500.00 
E506L250 е.а.22,000.00