Pkr I

5,500.00 22,000.00 

  • CNY: 79.03 ¥ - 316.11 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Pkr I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 1000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: G(5mC)N↑G(5mC) / (5mC)G↓N(5mC)G
  • Источник: Planomicrobium koreense 78k
  • Оптимальный буфер: SE-буфер Y
  • Оптимальная температура: 37
  • Температура инактивации, 20 мин при: 65
Артикул: E579 Категория:

Описание

Сайт узнавания:

G(5mC)N↑G(5mC)
(5mC)G↓N(5mC)G

Источник: Planomicrobium koreense 78k

Определение единицы активности:

За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4).

Определение активности PkrI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки:
1 и 6 — 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2: 0 мкл Pkr I
3: 0.5 мкл Pkr I
4: 1 мкл Pkr I
5: 2 мкл Pkr I

Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.

.

Субстрат для определения активности:

Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2].

Оптимальный буфер: SE-буфер Y

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
50 75 10 25 100 100

Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Лигирование:

Неспецифический гидролиз:

Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].

С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Примечание:

Литература:

1.Degtyarev S. Kh., Abdurashitov M.A., Kolyhalov A.A., Rechkunova N.I. Acl I, a new restriction endonuclease from Acinetobacter calcoaceticus recognizing 5′-AA^CGTT -3′. // Nucleic Acids Research, Vol. 20, No. 14, 37-87 (1992)
2. Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007)

Доступные варианты

АртикулРазмер фасовкиФасовкаЦена 
E579S50 е.а.5,500.00 
E580L250 е.а.22,000.00