Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGTCTCN | GGTCTCN↑ |
| CCAGAG(N)5 | CCAGAG(N)5↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus 31
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага T7
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 75 | 100 | 75 | 25 | 40 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется Dcm-метилированием (CmCWGG): GAGACCWGG
Не блокируется GGTCT(5mC) метилированием
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Шинкаренко Н.M., Лебедева Н.A., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1999).
