Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GKGCMC | GKGCM↑C |
| CMCGKG | C↓MCGKG |
Источник: Bacillus stearothermophilus S
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 100 | 50 | 75 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): GKGCCCWGG
Блокируется GKGmCMC метилированием
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
