Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCANNNNNTGC | GCANNNN↑NTGC |
| CGTNNNNNACG | CGTN↓NNNNACG |
Источник: Bacillus stearothermophilus AP
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 25 | 75 | 100 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W
Примечание:
Большой избыток фермента (более 5 ед на 1 мкг ДНК более 16 часов) приводит к появлению звездчатой активностиАктивность при 37°С 50% от максимальной.
Литература:
Abdurashitov, M.A., Belichenko, O.A., Shevchenko, A.V., Dedkov, V.S., Degtyarev, S.Kh. Nucleic Acids Res. 25: 2301-2302 (1997).
