Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCNGG | ↑CCNGG |
| GGNCC | GGNCC↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus SC
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dcm-)
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 50 | 50 | 50 | 100 | 60 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 55°С .
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm- метилированием: (CmCWGG) CCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
Примечание:
При 37°С активность 10% от максимальной.
Литература:
Дедков В.С., Мурадов С.В., Килева E.В., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2001).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х – corresponding author Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 – на английском языке
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
