Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CACGTC | CAC↑GTC |
| GTGCAG | GTG↓CAG |
Источник: Bacillus stearothermophilus SE-U62
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 75 | 100 | 75 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 60°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Degtyarev, S.Kh., Belichenko, O.A., Lebedeva, N.A., Dedkov, V.S., Abdurashitov, M.A. Nucleic Acids Res. 28: e56 (2000).
