Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCCGGG | CCC↑GGG |
| GGGCCC | GGG↓CCC |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sma I из Serratia marcescens
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 25°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (HindIII-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10% ПЭГ и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 25°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
Для фасовок Turbo (E177T и E178T) прикладывается буфер 10x SE-Буфер Y.
Turbo Sma I можно использовать как для быстрого гидролиза ДНК (в течение 15 мин), так и в стандартной реакции гидролиза в течение 1 ч.
Применение Turbo эндонуклеаз рестрикции:
– быстрый гидролиз (анализ) ДНК
– быстрое приготовление векторов для клонирования
– гидролиз ДНК двумя разными ферментами
Свойства Turbo фермента: С помощью 1 мкл эндонуклеазы рестрикции Turbo Sma I можно расщепить до 1 мкг двуцепочечной ДНКв 1x SE-Буфере Y в течение 15 мин (см. протокол ниже).
Препарат ДНК, используемый в реакции быстрого гидролиза Turbo ферментом, должен быть высокой степени очистки.
Данный Turbo фермент можно применять и в стандартной реакции гидролиза ДНК (в течение 1-16 ч).
Стандартный протокол Turbo реакции:
На 20 мкл реакционной смеси:
Y (x10) – 2 мкл
ДНК – 0,2-1 мкг
Дист. вода – до 20 мкл
+ 1мкл препарата Turbo Sma I эндонуклеазы рестрикции.
Инкубировать при 25°C в течение 15 мин.
Примечание:Литература:
Endow, S.A., Roberts, R.I., J. Mol. Biol. 112: 521-529 (1977).
