Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCWGG | ↑CCWGG |
| GGWCC | GGWCC↓ |
Источник: Pseudomonas species 6
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dcm-)
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 50 | 10 | 25 | 75 | 10 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG) : CCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.
Примечание:
При 37°С активность очень низкая.
Литература:
Дедков В.С., Томилова Ю.Э., Килева Е.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2002)
В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Л.П. Власенко, Ю.Э. Томилова, Ю.Г. Каширина, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярёв Эндонуклеаза рестрикции AjnI из Acinetobacter johnsonii R2 — изошизомер EcoRII, узнаёт 5’-↓CCWGG-3’, но не блокируется dcm-метилированием // Биотехнология, 2004, № 3, С.19-24
