Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| (N)7GAACNNNNNNTAC(N)12 | ↑(N)7GAACNNNNNNTAC(N)12↑ |
| 21(N)CTTGNNNNNNATG7(N) | ↓21(N)CTTGNNNNNNATG7(N)↓ |
Источник: Pseudomonas stutzeri N2
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Т7
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 10 | 100 | 30 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 30°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA.
Примечание:
При 37°С активность 20% от максимальной
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Дедков В.С., Килева E.В., Абдурашитов M.A., Гончар Д.A., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2001).
