Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CTGAAG(N)16 | CTGAAG(N)16↑ |
| GACTTC(N)14 | GACTTC(N)14↓ |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Acu I из Acinetobacter calcoaceticus SRW4
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y + SAM
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 50 | 50 | 75 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA, SAM
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл и SAM до концентрации 10мкМ. Допустимо использовать SAM в конечной концентрации 10-64 мкМ, т.е. 32 мМ штоковый раствор необходимо разбавлять в 3200-500 раз. Если объем реакционной смеси минимальный, например 10-20 мкл, то штоковый раствор SAM можно предварительно разбавить 5 мМ раствором H2SO4 или водой, хранить при -20°C.
При длительной инкубации BSA использовать не рекомендуется.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Дегтярев С.Х., Килева E.В., Дедков В.С. Неопубликованные данные (2001).
