Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCWGG | ↑CCWGG |
| GGWCC | GGWCC↓ |
Источник: Acinetobacter johnsonii R2
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 10 | 10 | 25 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 6 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Не блокируется dcm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): CCWGG в отличие от EcoRII
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y
Примечание:
При 37°С активность 10% от максимальной.
Литература:
В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Л.П. Власенко, Ю.Э. Томилова, Ю.Г. Каширина, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярёв Эндонуклеаза рестрикции AjnI из Acinetobacter johnsonii R2 — изошизомер EcoRII, узнаёт 5’-↓CCWGG-3’, но не блокируется dcm-метилированием // Биотехнология, 2004, № 3, С.19-24
