Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCGC | GCG↑C |
| CGCG | C↓GCG |
Источник: Bacillus stearothermophilus HH
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 50 | 25 | 50 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С
Лигирование:
После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 100 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием
5`- G(5mC)GC – 3`/3`- CG(5mC)G – 5` и
5`- G(5mC)GC – 3`/3`- CGCG – 5`.
Не блокируется при метилировании
5`- GCG(5mC) – 3`/3`- (5mC)GCG – 5` и
5`- GCG(5mC) – 3`/3`- CGCG – 5`.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Шаповалова M.A., Абдурашитов M.A., Туманова И.Ю., Дедков В.С., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2001).
