Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза (см. примечание):
| ASST | ASST↑ |
| TSSA | ↓TSSA |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген SetI из Streptomyces werraensis 37
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 pmol олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 1 час при 55°С в 20 μl реакционной смеси
Субстрат для определения активности:
Олигонуклеотидный дуплекс
5`-CGAGTTTATAGCTGGGCCCAAC-3`
3`-GCTCAAATATCGACCCGGGTTG-5`
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 25 | 75 | 75 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 50% фрагментов pBR322 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
Примечание: Внимание! SetI расщепляет канонический сайт и ряд других сайтов с меньшей активностью.
При длительной инкубации фермент может гидролизовать ДНК до коротких олигонуклеотидов.
Литература:
Tomilova J.E., Degtyarev S.Kh Substrate specificity of new restriction endonuclease SetI // In press
