База данных эндонуклеаз рестрикции и метилзависимых ДНК эндонуклеаз производства SibEnzyme

Список ферментов

Pcs I

Название фермента Pcs I
Прототип PcsI
Артикул SE-E505
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… (5mC)GNNNNN▼NN(5mC)G …3'
3'… G(5mC)NN▲NNNNNG(5mC) …5'
Источник Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K.
Оптимальный буфер SE-буфер 3M
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50500105050
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК. Определение активности PcsI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpySE49/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 7 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2 - исходная ДНК pMHpySE49/DriI 3 - 0.25 мкл Pcs I 4 - 0.5 мкл Pcs I 5 - 1 мкл Pcs I 6 - 2 мкл Pcs IПродукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5'-A(5mC)GT-3') и последовательность ДНК 5'-GACGTATAAAACGTT-3' 3'-CTGCATATTTTGCAA-5' В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI: 5'-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3' 3'-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5'
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов.
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер 3M PcsI
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Найакшина Т.Н., Тарасова М.В., Голикова Л.Н., Акишев А.Г., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Бактериальный штамм Paracoccus carotinifaciens 3К — продуцент сайт-специфической эндонуклеазы PcsI. // Патент Российской Федерации RU 2377294 C1 (2009).

Поиск по названию

Pcs I

Название фермента Pcs I
Прототип PcsI
Артикул SE-E505
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… (5mC)GNNNNN▼NN(5mC)G …3'
3'… G(5mC)NN▲NNNNNG(5mC) …5'
Источник Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K.
Оптимальный буфер SE-буфер 3M
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50500105050
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК. Определение активности PcsI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpySE49/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 7 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2 - исходная ДНК pMHpySE49/DriI 3 - 0.25 мкл Pcs I 4 - 0.5 мкл Pcs I 5 - 1 мкл Pcs I 6 - 2 мкл Pcs IПродукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5'-A(5mC)GT-3') и последовательность ДНК 5'-GACGTATAAAACGTT-3' 3'-CTGCATATTTTGCAA-5' В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI: 5'-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3' 3'-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5'
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов.
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер 3M PcsI
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Найакшина Т.Н., Тарасова М.В., Голикова Л.Н., Акишев А.Г., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Бактериальный штамм Paracoccus carotinifaciens 3К — продуцент сайт-специфической эндонуклеазы PcsI. // Патент Российской Федерации RU 2377294 C1 (2009).