Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCNNGC | GCN↑NGC |
| CGNNCG | CGN↓NCG |
Источник: Bacillus stearothermophilus C8
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 50 | 75 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется GC метилированием: 5`-G(5mC)NNGC-3`/3`-CGNN(5mC)G-5`.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y
Примечание:
При 37°С активность 50% от максимальной.
Литература:
Абдурашитов M.A., Дедков В.С., Михненкова Н.A., Килева E.В., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х. Непубликованные данные (2001).
Дедков В.С. Новая ДНК-метилтрансфераза M.BstC8I образует 5`-G(m5C)NNGC-3`.Изучение чувствительности эндонуклез рестрикции к M.BstС8I–метилированию.// Молекул. генетика, микробиол. и вирусол. № 1. с.35-40 (2012).
