База данных эндонуклеаз рестрикции и метилзависимых ДНК эндонуклеаз производства SibEnzyme

Список ферментов

Glu I

Название фермента Glu I
Прототип GluI
Артикул SE-E519
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G(5mC)▼NG(5mC) …3'
3'… (5mC)GN▲(5mC)G …5'
Источник Glacial ice bacterium GL24
Оптимальный буфер SE-буфер Y
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75752550100100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза единственного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 4-6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCNGC-3`/3`-CGNCG-5`, имеющим три 5-метилцитозина. Определение активности GluI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Glu I 3: 0.5 мкл Glu I 4: 1 мкл Glu I 5: 2 мкл Glu I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и один канонический сайт 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` [2].
Условия хранения 10 mM KH 2 PO 4 (pH 7.45); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Glu I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только C5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер Y.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Чмуж Е.В., Томилова Ю.Э., Наякшина Т.Н., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Штамм бактерий Glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Glu I. // Патент на изобретение RU 2322492 С1 (2006) В.А. Чернухин, Е.В. Чмуж, Ю.Э. Томилова, Т.Н. Наякшина, Д.А. Гончар, В.С. Дедков, С.Х. Дегтярев Новая сайт-специфическая эндонуклеаза Glu I узнает метилированную последовательность ДНК 5’-G(5mC)^NG(5mC)-3’/3’-(5mC)GN^(5mC)G-5’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, Т. 3, №2, с. 13-17

Поиск по названию

Glu I

Название фермента Glu I
Прототип GluI
Артикул SE-E519
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G(5mC)▼NG(5mC) …3'
3'… (5mC)GN▲(5mC)G …5'
Источник Glacial ice bacterium GL24
Оптимальный буфер SE-буфер Y
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
75752550100100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза единственного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 4-6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCNGC-3`/3`-CGNCG-5`, имеющим три 5-метилцитозина. Определение активности GluI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Glu I 3: 0.5 мкл Glu I 4: 1 мкл Glu I 5: 2 мкл Glu I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и один канонический сайт 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` [2].
Условия хранения 10 mM KH 2 PO 4 (pH 7.45); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Glu I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только C5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер Y.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Чмуж Е.В., Томилова Ю.Э., Наякшина Т.Н., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Штамм бактерий Glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Glu I. // Патент на изобретение RU 2322492 С1 (2006) В.А. Чернухин, Е.В. Чмуж, Ю.Э. Томилова, Т.Н. Наякшина, Д.А. Гончар, В.С. Дедков, С.Х. Дегтярев Новая сайт-специфическая эндонуклеаза Glu I узнает метилированную последовательность ДНК 5’-G(5mC)^NG(5mC)-3’/3’-(5mC)GN^(5mC)G-5’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, Т. 3, №2, с. 13-17