База данных эндонуклеаз рестрикции и метилзависимых ДНК эндонуклеаз производства SibEnzyme

Список ферментов

Bls I

Название фермента Bls I
Прототип BlsI
Артикул SE-E533
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания Неверный формат сайта узнавания
Источник Bacillus simplex 23
Оптимальный буфер SE-буфер W
Оптимальная температура 30 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1010501007550
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Определение активности BlsI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 7 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Bls I 3: 0.5 мкл Bls I (1/5) 4: 1 мкл Bls I (1/5) 5: 2 мкл Bls I (1/5) 6: 1 мкл неразбавленного фермента Bls I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` [2, 3].
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер W.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Томилова Ю.Э., Чмуж Е.В., Соколова О.О., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Штамм бактерий Bacillus simplex - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Bls I.// Патент на изобретение RU 2322494 С1 (2006) Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007) В.А. Чернухин, Ю.Э. Томилова, Е.В. Чмуж, О.О. Соколова, В.С. Дедков, С.Х. Дегтярев Сайт-специфическая эндонуклеаза Bls I узнает последовательность ДНК 5’-G(5mC)N^GC-3’ и расщепляет ее с образованием 3’-выступающих концов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, т. 3, №1, с. 28-33 Чернухин В.А., Гончар Д.А., Томилова Ю.Э., Болтенгаген А.А., Голикова Л.Н., Дегтрев С. Х. Метилзависимая сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза BlsI узнает и расщепляет последовательность ДНК 5` -RYNRY- 3` при наличии в ней не менее двух 5-метилцитозинов. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, Т. 9, № 2,с. 30-38 (2013).
Применение
  1. В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27. Д.А. Гончар, А.Г. Акишев, С.Х. Дегтярев BlsI- и GlaI- ПЦР анализ – новый метод исследования метилированных участков ДНК // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2010. – Т. 6 – № 1 – С. 5-12 А.Г. Акишев, Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, С.Х. Дегтярев Эпигенетическое типирование малигнантных клеточных линий человека с помощью BlsI- и GlaI ПЦР анализа // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 5 - 16

Поиск по названию

Bls I

Название фермента Bls I
Прототип BlsI
Артикул SE-E533
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания Неверный формат сайта узнавания
Источник Bacillus simplex 23
Оптимальный буфер SE-буфер W
Оптимальная температура 30 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1010501007550
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Определение активности BlsI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 7 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Bls I 3: 0.5 мкл Bls I (1/5) 4: 1 мкл Bls I (1/5) 5: 2 мкл Bls I (1/5) 6: 1 мкл неразбавленного фермента Bls I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` [2, 3].
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер W.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Томилова Ю.Э., Чмуж Е.В., Соколова О.О., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Штамм бактерий Bacillus simplex - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Bls I.// Патент на изобретение RU 2322494 С1 (2006) Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007) В.А. Чернухин, Ю.Э. Томилова, Е.В. Чмуж, О.О. Соколова, В.С. Дедков, С.Х. Дегтярев Сайт-специфическая эндонуклеаза Bls I узнает последовательность ДНК 5’-G(5mC)N^GC-3’ и расщепляет ее с образованием 3’-выступающих концов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, т. 3, №1, с. 28-33 Чернухин В.А., Гончар Д.А., Томилова Ю.Э., Болтенгаген А.А., Голикова Л.Н., Дегтрев С. Х. Метилзависимая сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза BlsI узнает и расщепляет последовательность ДНК 5` -RYNRY- 3` при наличии в ней не менее двух 5-метилцитозинов. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, Т. 9, № 2,с. 30-38 (2013).
Применение
  1. В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27. Д.А. Гончар, А.Г. Акишев, С.Х. Дегтярев BlsI- и GlaI- ПЦР анализ – новый метод исследования метилированных участков ДНК // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2010. – Т. 6 – № 1 – С. 5-12 А.Г. Акишев, Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, С.Х. Дегтярев Эпигенетическое типирование малигнантных клеточных линий человека с помощью BlsI- и GlaI ПЦР анализа // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 5 - 16