База данных эндонуклеаз рестрикции и метилзависимых ДНК эндонуклеаз производства SibEnzyme

Список ферментов

Kro I

Название фермента Kro I
Прототип KroI
Артикул SE-E541
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G▼C(5mC)GGC …3'
3'… CGG(5mC)C▲G …5'
Источник Kocurea rosea 307
Оптимальный буфер SE-буфер G
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50100255075100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pMHpaII1/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Определение активности KroI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpaII1/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2 - исходная ДНК, pMHpaII1/DriI 3 - 0.5 мкл Kro I 4 - 1 мкл Kro I 5 - 2 мкл Kro IПродукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pMHpaII1/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHpaII1, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHpaII1 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HpaII, которая модифицирует сайт узнавания 5`-CCGG-3` с образованием 5`-C(5mC)GG-3`/3`-GG(5mC)C-5`, и три сайта узнавания KroI 5`-GC(5mC)GGC-3`/3`-CGG(5mC)CG-5`.
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин, 200 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Kro I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1] и ДНК, метилированную MspI ДНК-метилтрансферазой.
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер G.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Журавлева Р.О., Тарасова Г.В., Болтенгаген А.А., Акишев А.Г., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Kocuria rosea - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы KroI. // Патент на изобретение RU 2394099 С1 (2010) В.А. Чернухин, Е.В. Килёва, Ю.Э. Томилова, А.А. Болтенгаген, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Д.А. Гончар, Л.Н. Голикова, С.Х. Дегтярёв Новая метилзависимая сайт-специфическая эндонуклеаза KroI узнаёт и расщепляет последовательность ДНК 5'-G^C(5mC)GGC-3' // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – Т. 7 – № 1 – С. 14 - 20

Поиск по названию

Kro I

Название фермента Kro I
Прототип KroI
Артикул SE-E541
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G▼C(5mC)GGC …3'
3'… CGG(5mC)C▲G …5'
Источник Kocurea rosea 307
Оптимальный буфер SE-буфер G
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50100255075100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pMHpaII1/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Определение активности KroI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHpaII1/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2 - исходная ДНК, pMHpaII1/DriI 3 - 0.5 мкл Kro I 4 - 1 мкл Kro I 5 - 2 мкл Kro IПродукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE.
Тестируемая ДНК Субстрат pMHpaII1/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHpaII1, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHpaII1 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HpaII, которая модифицирует сайт узнавания 5`-CCGG-3` с образованием 5`-C(5mC)GG-3`/3`-GG(5mC)C-5`, и три сайта узнавания KroI 5`-GC(5mC)GGC-3`/3`-CGG(5mC)CG-5`.
Условия хранения 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин, 200 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Kro I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1] и ДНК, метилированную MspI ДНК-метилтрансферазой.
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер G.
Примечания
Литература
  1. Чернухин В.А., Журавлева Р.О., Тарасова Г.В., Болтенгаген А.А., Акишев А.Г., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Kocuria rosea - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы KroI. // Патент на изобретение RU 2394099 С1 (2010) В.А. Чернухин, Е.В. Килёва, Ю.Э. Томилова, А.А. Болтенгаген, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Д.А. Гончар, Л.Н. Голикова, С.Х. Дегтярёв Новая метилзависимая сайт-специфическая эндонуклеаза KroI узнаёт и расщепляет последовательность ДНК 5'-G^C(5mC)GGC-3' // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – Т. 7 – № 1 – С. 14 - 20