База данных эндонуклеаз рестрикции и метилзависимых ДНК эндонуклеаз производства SibEnzyme

Список ферментов

Pkr I

Название фермента Pkr I
Прототип PkrI
Артикул SE-E579
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G(5mC)N▼G(5mC) …3'
3'… (5mC)G▲N(5mC)G …5'
Источник Planomicrobium koreense 78k
Оптимальный буфер SE-буфер Y
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50751025100100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4). Определение активности PkrI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Pkr I 3: 0.5 мкл Pkr I 4: 1 мкл Pkr I 5: 2 мкл Pkr I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE..
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` [2].
Условия хранения 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер Y.
Примечания
Литература
  1. В.А. Чернухин, Наякшина Т.Н, Гончар Д.А., Томилова Ю.Э., Тарасова М.В., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярёв С.Х. Новая сайт-специфическая метилзависимая ДНК эндонуклеаза PkrI узнаёт и расщепляет метилированную последовательность 5'-GCN^GC-3'/3'-CG^NCG-5', содержащую не менее 3-х 5-метилцитозинов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 35 - 42 Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007)

Поиск по названию

Pkr I

Название фермента Pkr I
Прототип PkrI
Артикул SE-E579
Вариант Turbo Отсутствует
Высококонцентрированная версия Отсутствует
Сайт узнавания
5'… G(5mC)N▼G(5mC) …3'
3'… (5mC)G▲N(5mC)G …5'
Источник Planomicrobium koreense 78k
Оптимальный буфер SE-буфер Y
Оптимальная температура 37 °C
Температура инактивации 65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50751025100100
Определение единицы активности За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4). Определение активности PkrI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки: 1 и 6 - 1 Kb SE ДНК-маркеры. 2: 0 мкл Pkr I 3: 0.5 мкл Pkr I 4: 1 мкл Pkr I 5: 2 мкл Pkr I Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE..
Тестируемая ДНК Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` [2].
Условия хранения 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование
Неспецифический гидролиз Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
Поставляется с ферментом 10 Х SE-буфер Y.
Примечания
Литература
  1. В.А. Чернухин, Наякшина Т.Н, Гончар Д.А., Томилова Ю.Э., Тарасова М.В., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярёв С.Х. Новая сайт-специфическая метилзависимая ДНК эндонуклеаза PkrI узнаёт и расщепляет метилированную последовательность 5'-GCN^GC-3'/3'-CG^NCG-5', содержащую не менее 3-х 5-метилцитозинов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 35 - 42 Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007)